Das Konzept dieses Praktikums besteht darin, ähnlich zur Grundlagenforschung in einem wissenschaftlichen Labor, mehrere Fragestellungen im Rahmen eines zusammenhängenden Projektes zu bearbeiten. Es kommen dabei unterschiedliche Methoden zum Einsatz, wobei ein Fokus auf der Durchführung molekularbiologischer Experimente liegt. Ergänzt werden diese durch genetische und zellbiologische Techniken, sowie durch bioinformatische Analysen. Dadurch soll ein Eindruck vermittelt werden, wie heutzutage durch die Kombination dieser verschiedenen Techniken konstruktiv und ohne viel zeitlichen Aufwand, wichtige Erkenntnisse über ein beliebiges Protein gewonnen werden können. Dabei dient die Bäckerhefe Saccharomyces cerevisiae als eukaryotischer, sowie das Darmbakterium Escherichia coli als prokaryotischer Modellorganismus.
Ein übergeordnetes Lernziel des Praktikums ist das selbständige Planen und Durchführen von Experimenten, sowie das Analysieren und schriftliche Niederlegen der erhaltenen Datensätze.
Methoden:
- In E. coli: Isolierung von Plasmiden. Klonierung. Expression rekombinanter Proteine. Nachweis über SDS-PAGE.
- In S. cerevisiae: Genetische Manipulation und Expression rekombinanter Proteine. Nachweis über SDS-PAGE und Western Blot. Affinitätsreinigung von rekombinanten Fusionsproteinen und Bestimmung der enzymatischen Aktivität .
- Nachweis von Nukleinsäuren in Gurgellösungen über quantitative PCR.
